Microsfere di PLGA per il rilascio controllato di siRNA anti-TNF-alpha nel trattamento dell’artrite reumatoide.

Introduzione. Gli siRNA sono frammenti di RNA a doppio filamento in grado di inibire in maniera selettiva l’espressione di un gene specifico. Recentemente, è stato proposto l’impiego di siRNA per inibire l’espressione del fattore di necrosi tumorale alfa (TNF-alpha) nel trattamento dell’artrite reumatoide (AR). L’Impiego terapeutico degli siRNA è però ostacolato dalla loro rapida degradazione in vivo e dalla scarsa penetrazione nelle cellule. Tra le strategie proposte per migliorare il profilo farmacocinetico degli siRNA, le microsfere biodegradabili offrono vantaggi quali possibilità di essere iniettate nel sito di somministrazione senza necessità di rimozione chirurgica dopo il completo rilascio della molecola incapsulata. È stato dimostrato che tali sistemi possono proteggere, in presenza di nucleasi, gli acidi nucleici incapsulati, rilasciarli per tempi lunghi e aumentarne la penetrazione all’interno delle cellule. Scopo del lavoro. Studiare il potenziale applicativo di microsfere biodegradabili a base di acido poli(lattico-co-glicolico) (PLGA), per il rilascio prolungato di siRNA contro TNF-alpha nel trattamento dell’AR. Metodi. Sono state sviluppate microsfere di PLGA contenenti un siRNA con sequenza specifica anti-TNF-alpha. Le microsfere sono state preparate mediante la tecnica di emulsione multipla/evaporazione del solvente. Le dimensione delle microsfere sono strate valutate mediante Laser Light Scattering, mentre la loro morfologia è stata studiata mediante microscopia elettronica a scansione. La quantità di siRNA incapsulato ed il profilo di rilascio in vitro sono stati valutati mediante spettrofotometria UV. Risultati. Sono state preparate microsfere di PLGA contenenti siRNA anti-TNF-alpha. Le microsfere appaiono sferiche, omogenee e non porose con un diametro medio di circa 30 microm. Le microsfere sono caratterizzate da un elevato contentuo di siRNA (0,200 nmoli siRNA/mg PLGA) dovuto ad un‘efficienza di incapsulazione di circa 70%. In studi di rilascio in vitro del siRNA dalle miscrosfere è stato osservato dopo un lieve effetto burst, seguito da un rilascio lento e costante per oltre 40 giorni. Conclusioni. Le microsfere di PLGA hanno mostrato caratteristiche tecnologiche ottimali come sistema di veicolazione per siRNA nel trattamento di patologie quali l’AR. Sono attualmente in corso studi per valutare il potenziale applicativo delle microsfere di PLGA per il rilascio di siRNA anti-TNF-alpha in un modello animale di AR.